丹东口岸2003—2005年进口海产品中3种致病菌的检验

目的掌握丹东口岸进口海产品中单核细胞增生李斯特菌、沙门菌和副溶血性弧菌污染情况。方法对丹东口岸2003—2005年进口的海产品3种致病菌的检验结果进行了分析。结果1965批进口海产品中检出不合格产品44批（2．24％）。其中32批（1．63％）检出单核细胞增生李斯特菌、6批（0．31％）检出沙门菌和6批（0．31％）检出副溶血性弧菌。不合格产品主要为冻章鱼、冻海螺、冻紫石房蛤、活河螺、冻河螺肉等。结论从丹东口岸进口的海产品3种致病菌的污染比较严重，特别是被单核细胞增生李斯特菌的污染最严重，海产品中冻章鱼和冻海螺被这3种致病菌的污染比较普遍。     

珠江三角洲地区副溶血性弧菌遗传多样性和致病性相关研究

副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,本文研究了珠江三角洲地区副溶血性弧菌的遗传多样性。从54株副溶血性弧菌出发,研究了它们的API20E生化反应、抗生素耐药性、O抗原血清型,进行了ERIC-PCR分子分型,并检测了两种毒力基因tdh和trh的分布。54株副溶血性弧菌可被分为6个生化反应类群,主要类群为Biochem-A;菌株对萘啶酮酸、环丙沙星、氯霉素均不耐药,而对氨苄青霉素耐药率最高,耐药率0.88;O抗原血清型分别为O1、O2、O3、O4、O5、O6、O8、O10、O11,O2为主要血清型,O3为临床主要血清型;ERIC-PCR分子分型将54株菌分成47个型别,ERIC-PCR图谱相似性大于0.80的类群有12个,没有明显的优势类群;有12株副溶血性弧菌为tdh阳性,阳性率为0.22,其中10株为临床来源菌株;有2株副溶血性弧菌为trh阳性,阳性率为0.04,均为食品分离株。珠三角地区食品和临床来源的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性。     

上海市市售带壳牡蛎微生物污染状况调查

目的了解上海市市售带壳牡蛎的微生物污染状况。方法2005年4月至2006年3月在上海市水产品批发市场每月2次采集牡蛎样品,共抽取了24份。按照GB/T4789—2003《食品卫生微生物学检验》中检验规程进行微生物检测。结果所有抽检样品均不合格,污染最严重的是大肠菌群,所检样品均超标,最高污染量达1·4×106MPN/g;其次是菌落总数,超标率达41·7%,最高污染量达2·6×107CFU/g;副溶血性弧菌污染也比较严重,检出率达29·2%,污染量在3·0×102~7·4×102MPN/100g;单核细胞增生李斯特菌未检出。结论上海市市售带壳牡蛎的微生物污染状况不容乐观,已对消费者健康构成了潜在威胁。     

食品中金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌和副溶血性弧菌的MPCR法检测

为快速检测食品中的金黄色葡萄球菌(SA)、单增李斯特氏菌(LM)和副溶血性弧菌(VP),根据各菌的相关基因设计引物,分别扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因-nuc、单增李斯特氏菌溶血素O上的hlyA基因和副溶血性弧菌的热稳定直接溶血素基因-tdh,建立一种MPCR快速检测食品中致病菌的方法,结果表明,三条特异性扩增片段分别为279bp、 243bp和202bp,经DNA测序证明其序列与模板被扩增片段一致.该方法具有良好的灵敏性和特异性.     

2种弧菌的实时荧光PCR快速检测

目的为快速、特异、灵敏的检测致病性弧菌,建立致病性弧菌的实时荧光PCR方法。方法针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物和Taqman荧光探针,建立实时荧光PCR检测方法。结果该方法能够特异性地检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdh、tcpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到10CFU/ml或0.1716μg/ml(pg/μl)DNA模板浓度。结论该方法特异性强、灵敏度高,适用于食品中致病性弧菌的快速检验。     

自动微流控膜芯片法检测副溶血性弧菌

目的建立自动微流控膜芯片检测法副溶血性弧菌的方法。方法利用自动微流控膜芯片对副溶血性弧菌进行检测,并采用行业标准SN/T 2424-2010实时荧光PCR方法进行比对验证。结果该技术具备副溶血性弧菌的检测能力,验证实际样品的检测结果与行业标准荧光PCR法一致。结论该方法快速、准确、直观,适合测定副溶血性弧菌。     

传统培养法与荧光PCR法检测弧菌的方法评价

目的比较标准检测方法与杜邦BAX System Q7快速检测方法检测副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌。方法采用GB 4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》、SN/T 1022—2010《进出口食品中弧菌霍乱弧菌检验方法》、DBS 13/004—2016《食品安全地方标准创伤弧菌检验》标准和杜邦BAX System Q7系统操作方法对1份同时污染副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的样品进行检测。结果BAX System Q7操作方法与标准操作方法检测结果一致,其中BAX System Q7可同时检测3种弧菌,用时20 h,而标准操作方法至少需要6 d。结论BAX System Q7检测方法与标准方法均具备高准确性,但相较于标准检测方法,BAX System Q7检测方法鉴定更快速、操作更简便,且3种弧菌可以同时鉴定。     

4起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件分离株病原学特征和溯源分析

目的 分析2019年淄博市4起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件分离株的病原学特征。方法 采用血清学分型、毒力基因检测(tlh、tdh、trh)、微量肉汤稀释法药敏试验和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对11株分离株进行分析。结果 9株患者分离株血清型鉴定为O3∶K6型,毒力基因均为tlh^+tdh+trh-;2株环境分离株血清型分别为O8∶K22和O1∶K32型,毒力基因均为tlh^+tdh-trh-。11株分离株全部对头孢唑林耐药,部分菌株对氨苄西林和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药。其中,2株对3种抗生素均耐药,对其他抗生素均敏感。经PFGE聚类分析,同一暴发事件中患者分离株高度相关。结论 4起暴发事件的患者分离株均为流行株O3∶K6型,均携带tdh基因,部分菌株出现多重耐药情况,同一暴发事件的分离株之间同源性高,提示可能为同源暴发,应加强对副溶血性弧菌污染源头的监管力度,减少食源性疾病的发生。     

绍兴市生食鱼中副溶血性弧菌毒力基因及耐药性与分子分型研究

目的 了解绍兴市生食鱼中副溶血性弧菌的污染状况、毒力基因携带情况、耐药性及分子分型情况。方法 采集绍兴地区354份生食鱼样品,参照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》进行菌株的分离与鉴定;利用荧光定量PCR技术对分离株进行毒力基因检测;采用微量肉汤稀释法和脉冲场凝胶电泳对分离株分别进行药物敏感试验和分子分型。结果 354份生食鱼中有13份样品检出副溶血性弧菌,总检出率为3.7%。13株菌全部检出tlh基因,tdh和trh基因均未检出。13株菌对头孢唑林均耐药,部分菌对氨苄西林耐药,对其他抗生素均敏感。PFGE条带分散,遗传特征多样。结论 绍兴市生食鱼中存在一定程度的副溶血性弧菌污染,菌株毒力基因携带率低,对头孢唑林普遍耐药,遗传特征多样。     

重组酶介导扩增技术快速检测水产品中副溶血性弧菌

目的 建立重组酶介导扩增技术（RAA）快速检测副溶血性弧菌的方法。方法 本研究根据副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus）tlh 基因序列设计特异性引物,经引物筛选,建立副溶血性弧菌的重组酶等温扩增（recombinase aidamplification, RAA）的快速检测方法。结果 该方法在25 ℃-43 ℃条件下,30 min即可观察到检测结果。特异性试验结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌与其他弧菌属菌种不存在交叉反应,灵敏度试验分析结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌检出限为5.3×101 CFU/mL。用100份样品验证RAA方法的可靠性,结果显示RAA方法和传统划线方法结果符合率为100%,表现出高度一致性。结论 本研究建立的RAA检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速等优点,为水产品中副溶血性弧菌的检测提供了新的发展方向。